一只3个月的混血雌性幼犬因慢性腹泻而前医院。患犬最近被当地动物收容所收留。它是的一窝3只小狗中的一只。据报道，其中一个小狗在8周龄时猜测死于犬细小病毒感染。其他的小狗有轻度症状，对症治疗有一定疗效。体检发现患犬有轻微的阴道炎，其他未发现异常。我们进行了干粪便涂片细胞学检查。
根据干粪便涂片的镜检照片（图1），回答下列问题:
粪便涂片有哪些微生物和结构?
镜检发现的较大结构的鉴别诊断是什么?
你认为下一步应该做什么诊断测试?
图1：干粪涂片的镜检图片。注意细箭头指出的细菌和粗箭头指出的囊状结构。（瑞氏染色x）
诊断：梨形鞭毛虫病
病例解析
粪便涂片主要由多种形态细菌菌落组成（图1，细箭头），应为正常的肠道菌群（问题1）。有几个圆形，大小不等的囊状结构，最大的8微米左右，含有粉色光滑的少量物质（图1，粗箭头）。也有无固定形状的浅紫色物质存在背景中，可能是食物营养物质（问题1）。对较大结构的鉴别诊断包括梨形鞭毛虫属和假寄生物如花粉、真菌孢子或泡沫（问题2）。其他诊断测试包括硫酸锌粪便浮选，鞭毛虫的ELISA检测，荧光免疫检验（IFA）和PCR测试（问题3）。
其他检查和病程进展
其他检查包括硫酸锌粪便浮选。
图2：硫酸锌粪便浮选镜检照片。大量的鞭毛虫囊胞，同时还有一些粪便物质。（相衬Phasecontrast，x）。
图3：硫酸锌粪便浮选显微照片（相位，x）
在上面的检查中，我们发现无数的椭圆形鞭毛虫囊，还有一些粪便碎片（图2和图3）。鞭毛虫囊含两个成形的滋养体，鞭毛轴丝，下侧有盘状分段，囊壁内最多可有四个胞核。在本病例中，囊内部的细节由于渗透性的人为影响而并不明显。这种影响将细胞质推向囊壁，使得囊呈现出一种独特的新月型或钻戒样的鞭毛虫属特征性的外观（图2和图3）。
讨论
梨形鞭毛虫属是原生动物鞭毛虫，可引起世界范围内的众多野生和家养动物的肠道感染物种，包括人类在内。梨形鞭毛虫物种目前有多种不同宿主专一性的分类；寄生于两栖动物的G.agilis，寄生于鸟类的G.ardeae和G.psittaci，寄生于啮齿动物的G.Muris，寄生于麝鼠和田鼠的G.microti，以及寄生于爬行动物的G.varani。狗经常感染有宿主特异性的种类——Giardiacanis犬属梨形鞭毛虫。然而肠梨形鞭毛虫（也称为G.intestinalis或以前称为G.lamblia）可以有一个广泛的宿主包括狗、猫、和人类。肠梨形鞭毛虫有7个群落（群落A-G）。人类感染的群落主要是A和B，狗是C和D，猫是F。除了跨物种传播，宠物受梨形鞭毛虫感染的风险是个体的免疫力低。美国最近的流行病学研究表明犬感染在年至年之间下降，而人类感染在同一时期稳定，显示一个季节性的趋势。这反驳了犬与人的传播效率高的说法，但可能不适用在世界的其他地区。与动物接触密切的人群和儿童是梨形鞭毛虫感染的增加性风险人群，一些地方并发感染也是普遍的。针对家养宠物的梨形鞭毛虫人兽共患病的预防措施包括勤洗手、清洁和消毒宠物经常出现的地方，和其他类似的卫生措施.
犬猫梨形鞭毛虫病的患病率在5-15%之间。幼畜更容易测试出鞭毛虫感染阳性，相关报道显示患病率为36-50%。根据一项针对全美宠物狗鞭毛虫感染的全国性调查，小于6月龄的幼犬的患病率是13.1%，而超过3岁的成年狗的患病率还不到1%。动物收容所中的流浪狗相对于有主人的宠物感染鞭毛虫的风险更高。而在本病例中，患犬是最近被收容所收养的幼犬，梨形鞭毛虫感染可能性很高。
梨形鞭毛虫属的生命周期由2阶段组成，滋养体和包囊。滋养体是活跃且移动的一个阶段，而包囊则是生存能力较高负责传播的时期。狗和猫常常因摄入含有包囊的食物或水而感染。进入机体后，包囊裂开，滋养体进入到肠道。滋养体可在易感宿主的小肠通过二等分裂增殖。滋养体可以在肠腔中保持游离状态，也可以通过腹侧吸盘附着在肠粘膜。包囊在虫体转移到结肠时形成。感染通常是通过包囊的粪-口传播途径，或者是直接接触受感染的个体和间接接触污染物。只要10个梨形鞭毛虫包囊就可以启动感染，发作时长一般是狗平均8天，猫平均10天。
虽然某些动物感染梨形鞭毛虫可能是亚临床症状，但最常见的临床症状是急性、间歇性、慢性腹泻。腹泻是由肠道吸收不良和分泌过多所引起，这其中包含多种因素，如毒素产生，正常菌群被破坏，正常肠上皮细胞酶被抑制和微绒毛钝化。大便通常色泽暗淡，柔软或水样并伴有粘液。粪便通常气味很臭且可能存在脂肪痢。其他临床症状包括腹部不适、腹痛和胃痉挛。这种腹泻对于免疫能力正常的动物通常是自限性的。然而在慢性腹泻动物，可能会存在体重减轻。
最能确定梨形鞭毛虫病的诊断手段是在粪便样本中发现包囊或滋养体，因为临床症状和实验室血液测试结果通常是非特异性。新鲜粪便的湿涂片中可能会发现滋养体，但没有发现也不能排除感染。包囊和滋养体都可以在感染5-7天内的粪便中找到。滋养体是泪珠形状且大小为15×8um，而包囊是新月形状且大小12x7um。硫酸锌粪便浮选技术也可以发现鞭毛虫滋养体或包囊，且优于蔗糖离心浮选法因为它不太可能使微生物变形。然而随着梨形鞭毛虫属生物体断断续续的排出，可能需要持续3-5天多次检查新鲜粪便样品。其他诊断测试包括荧光免疫检验（IFA），酶联免疫法（ELISA）检测抗原和聚合酶链反应（PCR）测定。IFA被一些寄生虫专家认为是权威标准，但这个测试的缺点是需要专用设备。随着多种商业化的ELISA试剂能够检测粪便中梨形鞭毛虫包囊，可作为粪便浮选和湿涂片的辅助手段。PCR检测通常用来确定发现的肠梨形鞭毛虫具体是哪一种群落。
梨形鞭毛虫病的治疗包括芬苯哒唑、甲硝哒唑或联用吡喹酮、噻嘧啶、非班太尔。感染梨形鞭毛虫并不会发生永久免疫，因此再次感染是可能的。
病例结果
我们用芬苯哒唑治疗患犬，2周后复查没有发现梨形鞭毛虫的存在。
E.Behling-Kelly
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